ABI7900熒(ying)光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)

壹、ABI7900熒(ying)光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)是(shi)繼(ji)7700、5700型熒光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)之後(hou)，ABI公司推出(chu)的(de)高通量(liang)實(shi)時熒(ying)光定(ding)量(liang)PCR系統。它(ta)是(shi)兼(jian)容96孔(kong)板和(he)384孔(kong)板的(de)熒光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)，也(ye)是(shi)可(ke)選手(shou)工(gong)進(jin)樣(yang)和(he)自(zi)動進(jin)樣(yang)的(de)熒光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)。7900HT型熒光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)可(ke)滿足(zu)從(cong)中(zhong)通(tong)量(liang)到高通量(liang)實(shi)驗(yan)的(de)需求(qiu)。  

二(er)、ABI7900熒光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)主要特(te)點(dian):  

（1）高效(xiao)平臺(tai)-7900HT系統是(shi)為(wei)支(zhi)持高通量(liang)而(er)構(gou)建的(de)，光學(xue)系統經(jing)優化以適用(yong)於384孔(kong)板熒(ying)光信(xin)號的(de)激活(huo)和實(shi)時檢(jian)測。  

（2）結(jie)果(guo)可靠-7900HT系統采用(yong)了(le)與7700、5700相同的(de)定(ding)量(liang)原(yuan)理(li)，利用Ct值(zhi)（Ct定(ding)義(yi)為(wei)在(zai)基(ji)線上(shang)方產(chan)生可(ke)檢(jian)測到的(de)統計(ji)學(xue)上(shang)顯著(zhu)的(de)熒光發(fa)射的(de)這壹PCR循環(huan)）和起始(shi)拷(kao)貝(bei)數的(de)對應(ying)關(guan)系，通(tong)過外標(biao)準曲線精確(que)計(ji)算未(wei)知(zhi)樣(yang)品(pin)的(de)起始(shi)拷(kao)貝數(shu)。  

（3）高度(du)重(zhong)現(xian)性(xing)-7900HT系統的(de)熒光檢(jian)測發(fa)生在(zai)PCR對(dui)數期的(de)起始(shi)，因(yin)此(ci)反(fan)應(ying)管中各(ge)組分(fen)沒有任(ren)何限(xian)制(zhi)反(fan)應因(yin)素，從(cong)而(er)確保檢(jian)測結(jie)果(guo)都(dou)是(shi)精確(que)並能(neng)重(zhong)復(fu)的(de)。  

（4）先(xian)進(jin)的(de)熒光檢(jian)測技(ji)術-RISM®7900HT熒光定(ding)量(liang)PCR系統在(zai)不(bu)降(jiang)低(di)速度(du)、分(fen)辨(bian)率的(de)情(qing)況下(xia)有效(xiao)提高了(le)產(chan)率，這是(shi)基(ji)於先(xian)進(jin)的(de)熒光檢(jian)測技(ji)術：壹束(shu)激(ji)光掃(sao)描並激(ji)活(huo)384個孔(kong)的(de)每壹個孔(kong)裏(li)的(de)熒光染料(liao)，熒光信(xin)號通(tong)過光柵(zha)分(fen)光，經(jing)過分(fen)離(li)的(de)多(duo)色熒光同時到達CCD攝像機，實(shi)現多(duo)色熒光同時檢(jian)測。  

（5）自(zi)動進(jin)樣(yang)裝(zhuang)置(zhi)-7900HT系統配(pei)備有自(zi)動化配(pei)件(jian)可取得(de)高效(xiao)率。自(zi)動化裝(zhuang)置可(ke)容納84塊384孔(kong)板，機械手(shou)臂可按(an)壹定(ding)順(shun)序(xu)將(jiang)待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)板(ban)運(yun)送至主機內(nei)，配(pei)備的(de)條形(xing)碼閱(yue)讀器（Barcodereader）可自(zi)動識別進(jin)入(ru)主機的(de)樣(yang)品(pin)板(ban)編(bian)號，使妳在(zai)任(ren)何時間(jian)可以在(zai)樣(yang)品(pin)行(xing)列(lie)中插(cha)入(ru)或替代樣(yang)品(pin)板(ban)。  

（6）多(duo)樣(yang)的(de)化學(xue)試劑(ji)-7900HT型熒光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)上(shang)可使用(yong)的(de)化學(xue)試劑(ji)包(bao)括TaqMan熒光探(tan)針(zhen)法(fa)和(he)SYBRGreen熒(ying)光染料(liao)法。TaqMan探(tan)針(zhen)法(fa)具(ju)有高度(du)的(de)靈敏度(du)和特(te)異(yi)性(xing)，適用(yong)於實(shi)時定(ding)量(liang)的(de)多(duo)重(zhong)反(fan)應(ying)或單核(he)苷酸(suan)多(duo)態(tai)性(xing)分(fen)析(xi)（SNP）。SYBRGreen染料(liao)應用(yong)於目標(biao)鑒定(ding)（篩選測定(ding)）或者在(zai)只(zhi)需用少數(shu)幾(ji)個反應(ying)的(de)測定(ding)中(zhong)為(wei)理(li)想(xiang)。  

（7）有效(xiao)防(fang)汙染-7900HT系統在(zai)PCR全過程中使用(yong)專(zhuan)門設計(ji)的(de)和始(shi)終(zhong)密閉的(de)樣(yang)品(pin)管(guan)。在(zai)加入樣(yang)品(pin)和(he)試劑(ji)後(hou)這些(xie)管(guan)子(zi)便(bian)立即封(feng)閉並在(zai)擴(kuo)增(zeng)和(he)檢(jian)測過程中保持這種狀態(tai)，這樣(yang)就可以大大(da)地(di)減少(shao)汙染的(de)機會；此(ci)外(wai)，7900HT系統不(bu)存(cun)在(zai)PCR後(hou)處(chu)理(li)，有效(xiao)防(fang)止擴(kuo)增(zeng)產(chan)物對實(shi)驗(yan)環(huan)境(jing)的(de)汙染而(er)造成的(de)假(jia)陽(yang)性。  

（8）多(duo)種定(ding)量(liang)方(fang)法(fa)-ABIPRISM®7900HT序(xu)列(lie)檢(jian)測系統軟(ruan)件(jian)為(wei)基(ji)因(yin)表(biao)達提(ti)供壹種定(ding)量(liang)化方(fang)法。定(ding)量(liang)是(shi)從(cong)壹個標(biao)準曲線上(shang)直接測定(ding)目標(biao)（基因(yin)）的(de)量。相(xiang)對(dui)定(ding)量(liang)方(fang)法(fa)是(shi)通(tong)過與標(biao)定(ding)樣(yang)品(pin)相(xiang)比(bi)較而(er)計算未(wei)知(zhi)樣(yang)品(pin)的(de)量，不(bu)需(xu)要標(biao)準曲線。  

三(san)、原理介(jie)紹(shao)：  

1.定(ding)量(liang)，為(wei)了(le)測定(ding)未(wei)知(zhi)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)目標(biao)（基因(yin)）的(de)數量(liang)，7900HT系統可(ke)用(yong)來測(ce)定(ding)樣(yang)品(pin)的(de)CT，然後用壹條(tiao)標(biao)準曲線來(lai)測定(ding)起(qi)始(shi)的(de)拷貝(bei)數(shu)。在(zai)標(biao)準曲線的(de)繪制(zhi)中(zhong)，7900HT系統軟(ruan)件(jian)首先(xian)用(yong)已(yi)知(zhi)的(de)起始(shi)拷(kao)貝數(shu)的(de)幾種稀釋(shi)度(du)計算(suan)它(ta)們(men)的(de)CT值。接著(zhe)，軟(ruan)件(jian)使用(yong)測(ce)得(de)的(de)CT值對(dui)應(ying)於起(qi)始(shi)拷貝(bei)數的(de)對數(shu)值(zhi)作圖。至(zhi)少(shao)在(zai)五(wu)個數量(liang)級(ji)範圍(wei)中兩者(zhe)呈(cheng)線性(xing)關系。  

2.相(xiang)對定(ding)量(liang)，對(dui)於基(ji)因(yin)表(biao)達研(yan)究(jiu)來說(shuo)，相對定(ding)量(liang)是(shi)理(li)想(xiang)的(de)方法(fa)。這裏(li)不是(shi)應(ying)用標(biao)準曲線而(er)是(shi)相(xiang)對於標(biao)定(ding)樣(yang)品(pin)計(ji)算(suan)表達水(shui)平。用(yong)壹個內源(yuan)對(dui)照(zhao)來(lai)標(biao)定(ding)樣(yang)品(pin)的(de)量。這壹方(fang)法(fa)與(yu)7900HT系統在(zai)壹個多(duo)重(zhong)反(fan)應(ying)中(zhong)能(neng)同時對(dui)目標(biao)和內源(yuan)對(dui)照(zhao)進(jin)行(xing)定(ding)量(liang)測(ce)定(ding)的(de)能(neng)力(li)相(xiang)結(jie)合，可(ke)實(shi)現高效(xiao)、高通量(liang)的(de)基因(yin)表(biao)達研(yan)究(jiu)。  

3.有效(xiao)的(de)SNP檢(jian)測手(shou)段(duan)，除實(shi)時定(ding)量(liang)測(ce)定(ding)以外，7900HT系統包(bao)括對於已(yi)知(zhi)的(de)單壹核(he)苷酸(suan)多(duo)態(tai)性(xing)（SNPS）作大(da)規(gui)模(mo)篩選的(de)軟(ruan)件(jian)。在(zai)壹對(dui)等(deng)位(wei)基因(yin)系統中(zhong)，用(yong)對應(ying)於兩個等位(wei)基因(yin)的(de)兩個TaqMan探(tan)針(zhen)在(zai)同壹個試管中做多(duo)重(zhong)PCR反(fan)應(ying)。反(fan)應(ying)終(zhong)止時(shi)所(suo)產(chan)生的(de)熒光用(yong)7900HT系統進(jin)行(xing)測定(ding)，實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)通過分(fen)析(xi)軟(ruan)件(jian)迅速取得(de)。  

四、儀器規格(ge)和(he)技術指標(biao):  

（1）系統組(zu)成(cheng)，7900HT熒光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)－384孔(kong)或96孔(kong)可更(geng)換式(shi)半(ban)導(dao)體控(kong)溫(wen)PCR儀(yi)，488nm長(chang)壽(shou)氬離(li)子(zi)激(ji)光器(qi)，X,Y雙(shuang)軸同步熒光掃(sao)描頭。  

（2）光柵(zha)和CCD檢(jian)測裝(zhuang)置，自(zi)動進(jin)樣(yang)裝(zhuang)置(zhi)，DELLGX270電(dian)腦，Windows2000操作系統，儀(yi)器(qi)控(kong)制(zhi)，數(shu)據(ju)采集(ji)及結果(guo)分(fen)析(xi)軟(ruan)件(jian)，PrimerExpress引物探(tan)針(zhen)設(she)計(ji)軟(ruan)件(jian)。  

（3）大(da)產(chan)率，實(shi)時定(ding)量(liang)檢(jian)測－5000樣(yang)品(pin)/天(tian)（標(biao)準模(mo)式(shi)），96樣(yang)品(pin)/35分(fen)鐘(zhong)（快速(su)模(mo)式(shi)），終(zhong)點(dian)SNP分(fen)析(xi)－30000樣(yang)品(pin)/2.5小時。  

（4）裝(zhuang)機指(zhi)標(biao)，以99.7%的(de)置信(xin)度(du)明確區分(fen)濃(nong)度(du)差別兩倍（5000和10000拷(kao)貝(bei)）的(de)樣(yang)品(pin)的(de)定(ding)量(liang)結(jie)果(guo)試劑(ji)和(he)消(xiao)耗(hao)品(pin)。  

（5）完(wan)備的(de)通用(yong)基(ji)本(ben)試劑(ji)盒(he)和(he)消耗(hao)品(pin)，十(shi)二(er)萬種TaqmanGeneExpressionAssays人、大(da)鼠(shu)、小鼠(shu)基(ji)因(yin)組(zu)基(ji)因(yin)表(biao)達分(fen)析(xi)試劑(ji)盒(he)，二(er)百萬種TaqmanValidatedSNPGenotypingAssays人、大(da)鼠(shu)、小鼠(shu)基(ji)因(yin)組(zu)SNP檢(jian)測試劑(ji)盒(he)。  

（6）Taqman低(di)密度(du)表達譜(pu)芯(xin)片，CustomAssays代客(ke)設計(ji)、合成(cheng)引(yin)物探(tan)針(zhen)服務。