GE_AKTA Pilot蛋(dan)白(bai)純(chun)化儀(yi)是生(sheng)物化學(xue)研究(jiu)領(ling)域(yu)的重(zhong)要(yao)操(cao)作(zuo)技術
GE_AKTA Pilot蛋(dan)白(bai)純(chun)化儀(yi)廣泛(fan)應用(yong)於(yu)生(sheng)物化學(xue)研究(jiu)應用(yong)領(ling)域(yu),是重(zhong)要(yao)的(de)操(cao)作(zuo)技術。典型的真核(he)細(xi)胞(bao)含有(you)數千種不同(tong)的蛋(dan)白(bai)質,有(you)些(xie)很豐富,有(you)些(xie)只包含幾(ji)個拷(kao)貝。要(yao)研究(jiu)某種蛋(dan)白(bai)質,必須先(xian)從(cong)其(qi)他(ta)蛋(dan)白(bai)質和(he)非蛋(dan)白(bai)質分(fen)子(zi)中純化出(chu)該(gai)蛋(dan)白(bai)質。
蛋(dan)白(bai)純(chun)化儀(yi)利用(yong)顆(ke)粒不同(tong)程(cheng)度(du)的(de)顆(ke)粒吸(xi)附力(li)來使(shi)分(fen)離(li)的(de)目(mu)的達(da)到(dao)蛋(dan)白(bai)質的(de)選(xuan)擇(ze)吸(xi)附分(fen)離(li)。蛋(dan)白(bai)純(chun)化儀(yi)采(cai)用(yong)低(di)溫(wen)有機溶(rong)劑沈(chen)澱(dian)法(fa),使用(yong)如(ru)甲(jia)醇(chun),乙(yi)醇等(deng)與(yu)水(shui)可混(hun)溶(rong)的有(you)機(ji)溶(rong)劑,降(jiang)低(di)多(duo)數蛋(dan)白(bai)質的(de)溶(rong)解(jie)度(du)並(bing)且將其(qi)析(xi)出(chu),和(he)鹽(yan)析(xi)相比(bi)較,這種方法(fa)的分(fen)辨(bian)率更加(jia)的高,然(ran)而(er)蛋(dan)白(bai)質比(bi)較容易(yi)變(bian)形(xing),需要(yao)在低(di)溫(wen)下(xia)進(jin)行。
蛋(dan)白(bai)純(chun)化儀(yi)還(hai)吸(xi)取(qu)按(an)照分(fen)子(zi)大(da)小(xiao)不壹(yi)樣(yang)的方法(fa),在介(jie)質中對蛋(dan)白(bai)質離(li)心(xin)時,蛋(dan)白(bai)質沈(chen)降(jiang)速度(du)取(qu)決於(yu)它(ta)的(de)質量(liang)和(he)密(mi)度(du),質量(liang)和(he)密(mi)度(du)越(yue)大,那(na)麽沈(chen)降(jiang)越快(kuai);凝膠過濾(壹(yi)種柱(zhu)層(ceng)析(xi));超(chao)過(guo)濾(lv)(利用(yong)蛋(dan)白(bai)質分(fen)子(zi)不能(neng)從半透膜通(tong)過(guo)的(de)性(xing)質)。
GE_AKTA Pilot蛋(dan)白(bai)純(chun)化儀(yi)使用(yong)註(zhu)意事(shi)項(xiang):
1.為了(le)避(bi)免蛋(dan)白(bai)質變(bian)性(xing),不要(yao)對樣(yang)品(pin)劇(ju)烈(lie)攪動和(he)反復凍(dong)融。
2.緩(huan)沖(chong)溶(rong)液成(cheng)分(fen)盡(jin)量(liang)模擬(ni)細胞(bao)內(nei)環(huan)。
3.在(zai)純(chun)化分(fen)離(li)過(guo)程(cheng)中,均必須時(shi)刻對它(ta)的(de)穩(wen)定性(xing)註(zhu)意維(wei)護(hu),使它(ta)的(de)活(huo)性(xing)得(de)到(dao)保(bao)護(hu),要註(zhu)意避(bi)免蛋(dan)白(bai)質的(de)氧化,避(bi)免(mian)重(zhong)金(jin)屬對(dui)目(mu)標蛋(dan)白(bai)的(de)破壞(huai),避(bi)免(mian)微(wei)生(sheng)物生(sheng)長(chang),避(bi)免(mian)蛋(dan)白(bai)酶(mei)對目(mu)標蛋(dan)白(bai)的(de)降解(jie)。
4.盡(jin)可能(neng)置(zhi)於(yu)冰上(shang)或(huo)者(zhe)在(zai)冷(leng)庫(ku)內進(jin)行操(cao)作(zuo)。
5.蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)不要(yao)太稀。
6.GE_AKTA Pilot蛋(dan)白(bai)純(chun)化儀(yi)除非是進行聚焦層,否則(ze)需(xu)要(yao)合(he)適的pH環境(jing),防(fang)止所(suo)使(shi)用(yong)的(de)緩(huan)沖(chong)溶(rong)液pH與(yu)pI相同(tong),使(shi)蛋(dan)白(bai)質的(de)沈(chen)澱得(de)以(yi)避(bi)免(mian)。