1.內(nei)標(biao)的(de)設(she)計和(he)選(xuan)擇：設(she)計壹(yi)個(ge)特異性(xing)的(de)內(nei)標(biao)是第壹步，這(zhe)個(ge)內(nei)標(biao)可以是基(ji)因(yin)組上(shang)的(de)壹個(ge)特(te)定序(xu)列(lie)或者(zhe)是壹(yi)個(ge)已知(zhi)的(de)基因(yin)。這(zhe)個(ge)內(nei)標(biao)的(de)長度(du)應(ying)該與待檢測的(de)基因(yin)組序(xu)列(lie)相(xiang)當，以便於在同時(shi)進行PCR反應(ying)時，可以擴(kuo)增(zeng)出與待檢測基因(yin)組大小(xiao)相(xiang)同的(de)產物(wu)。

 

　　2.內(nei)標(biao)加(jia)入的(de)比例：標的(de)比例應(ying)該與待檢測的(de)基因(yin)組序(xu)列(lie)相(xiang)同。這(zhe)可以通(tong)過在反(fan)應(ying)體系(xi)中同時(shi)加(jia)入內(nei)標(biao)和待檢測的(de)基因(yin)組序(xu)列(lie)的(de)引物(wu)和(he)探(tan)針(zhen)來(lai)實(shi)現(xian)。

 

　　3.內(nei)標(biao)的(de)擴增(zeng)：內(nei)標(biao)應(ying)該與待檢測的(de)基因(yin)組序(xu)列(lie)同時(shi)擴增。這(zhe)可以通(tong)過在反(fan)應(ying)體系(xi)中同時(shi)加(jia)入內(nei)標(biao)和待檢測的(de)基因(yin)組序(xu)列(lie)的(de)引物(wu)和(he)探(tan)針(zhen)來(lai)實(shi)現(xian)。

 

　　4.內(nei)標(biao)的(de)檢測：在結(jie)束後(hou)，通過熔解(jie)曲線分析產物(wu)，可以檢(jian)測內(nei)標(biao)是否(fou)正(zheng)確(que)地(di)擴增(zeng)。如(ru)果(guo)內(nei)標(biao)擴增出了(le)正(zheng)確(que)的(de)產物(wu)，那(na)麽(me)說(shuo)明(ming)實驗的(de)質量(liang)控(kong)制(zhi)是有(you)效(xiao)的(de)。

 

　　5.內(nei)標(biao)的(de)驗證(zheng)：在進(jin)行PCR實驗時(shi)，需要驗證(zheng)內(nei)標(biao)的(de)擴增(zeng)效(xiao)果(guo)。這(zhe)可以通(tong)過對(dui)壹系(xi)列(lie)已知(zhi)濃度的(de)內(nei)標(biao)進行PCR反應(ying)來(lai)實(shi)現(xian)。如(ru)果(guo)內(nei)標(biao)的(de)擴增(zeng)產物(wu)符合(he)預期的(de)熔解(jie)曲線，那麽就可以確(que)認(ren)內(nei)標(biao)是有(you)效(xiao)的(de)。

 

　　6.內(nei)標(biao)的(de)應(ying)用：通過使用內(nei)標(biao)，可以評估熒光定量(liang)PCR實驗的(de)精(jing)密度(du)和(he)靈(ling)敏度。內(nei)標(biao)可以用於評估實驗中的(de)變(bian)異系(xi)數(shu)和(he)標準差(cha)，從而確(que)定實(shi)驗的(de)精(jing)密度(du)。同時(shi)，通過使用內(nei)標(biao)還可以評估實驗的(de)靈敏(min)度(du)，因(yin)為內(nei)標(biao)的(de)濃度(du)可以影(ying)響(xiang)實驗的(de)線性範圍和(he)檢測下限(xian)。