二手(shou)蛋白純(chun)化儀是利用顆(ke)粒不同(tong)程度的顆(ke)粒吸(xi)附力來使(shi)分(fen)離的(de)目(mu)的達到蛋白質(zhi)的(de)選擇吸(xi)附分(fen)離。設(she)備(bei)采用低(di)溫(wen)有機溶(rong)劑(ji)沈(chen)澱(dian)法，使(shi)用(yong)如甲(jia)醇(chun)，乙(yi)醇(chun)等(deng)與(yu)水可(ke)混(hun)溶(rong)的有(you)機溶(rong)劑(ji)，降(jiang)低(di)多數(shu)蛋白質(zhi)的(de)溶(rong)解度並(bing)且(qie)將(jiang)其析出(chu)，和(he)鹽析相(xiang)比(bi)較，這(zhe)種(zhong)方法的(de)分(fen)辨率更加(jia)的高(gao)，然(ran)而蛋白質(zhi)比(bi)較容(rong)易變(bian)形(xing)，需要在低(di)溫(wen)下進行(xing)。
1.如(ru)果(guo)凝膠(jiao)過(guo)濾(lv)的介質(zhi)是幹粉(fen)，則需在凝膠(jiao)過(guo)濾(lv)緩沖液(ye)中*溶(rong)脹(zhang)。
2.在遠(yuan)離過(guo)往通(tong)道及(ji)直(zhi)接光(guang)照的恒(heng)溫環境，將層(ceng)折(zhe)柱垂(chui)直(zhi)安(an)裝(zhuang)在穩(wen)固(gu)的實驗(yan)室(shi)支架上。
3.用(yong)壹(yi)註(zhu)射器將凝膠(jiao)過(guo)濾(lv)緩沖液(ye)從柱子(zi)的(de)輸(shu)出(chu)管註(zhu)入柱子(zi)，至緩沖液達到柱子(zi)支持體平(ping)面之上，註(zhu)射器留(liu)在輸(shu)出(chu)端以堵(du)住柱子(zi)。
4.沿(yan)著(zhe)壹(yi)根順柱子(zi)內(nei)壁(bi)而放(fang)的玻(bo)璃(li)棒(bang)將(jiang)凝膠(jiao)混(hun)懸(xuan)物倒入柱子(zi)至所設高(gao)度，再小心往凝膠(jiao)頂部加(jia)入1cm高(gao)的(de)壹(yi)層(ceng)緩(huan)沖液，並(bing)連接(jie)緩沖液(ye)貯存(cun)容器，取去堵著(zhe)柱子(zi)輸(shu)出(chu)管的註(zhu)射器，用2~3倍(bei)柱床體積的(de)緩沖(chong)液(ye)請洗柱子(zi)。
5.流盡柱子(zi)凝膠(jiao)頂部上(shang)面(mian)的(de)緩沖液、關閉(bi)其輸(shu)出(chu)管。
6.加(jia)入相(xiang)當於(yu)柱床體積1%~5%的(de)蛋白質(zhi)樣品(pin)。開放(fang)輸(shu)出(chu)管，讓(rang)樣品(pin)流進柱床，凝膠(jiao)上(shang)面(mian)的(de)柱子(zi)內(nei)壁(bi)以緩(huan)沖(chong)液沖(chong)洗。
7.在凝膠(jiao)頂上用吸(xi)管加(jia)入1cm高(gao)的(de)緩(huan)沖(chong)液層(ceng)，重新與(yu)緩(huan)沖液貯存(cun)容器連接(jie)，開始(shi)洗脫。
8.分(fen)部收(shou)集流出液(ye)。每分(fen)部相(xiang)當(dang)於(yu)1%總柱床體積，分(fen)別測每個(ge)分(fen)部的(de)A280，並(bing)各取(qu)小份(fen)樣品(pin)測生(sheng)物活性(xing)，選出(chu)有(you)活(huo)性(xing)的分(fen)部用(yong)SDS-PAGE檢(jian)測所含(han)蛋白質(zhi)的(de)數(shu)量和(he)質(zhi)量，合(he)並(bing)含(han)目(mu)標蛋白的(de)分(fen)部。
9.用(yong)2~3個(ge)柱床體積的(de)凝膠(jiao)過(guo)濾(lv)緩沖液(ye)洗柱，柱子(zi)保(bao)存(cun)在含(han)0.02%疊(die)氮鈉的(de)緩(huan)沖液(ye)中，柱於(yu)可無(wu)限(xian)次(ci)地(di)使用(yong)。
