BD_FACSCanto流(liu)式細胞儀(yi)作為壹種(zhong)先(xian)進(jin)的細胞定量分(fen)析檢(jian)測儀(yi)器,設計上采用(yong)了(le)許(xu)多(duo)*的技(ji)術,其(qi)中涉(she)及到(dao)液流系(xi)統、光(guang)路(lu)系(xi)統、信(xin)號測(ce)量和細胞分(fen)選(xuan)等(deng)4個(ge)方面。
流(liu)式(shi)細胞儀(yi)通常(chang)以激(ji)光(guang)作(zuo)為發(fa)光(guang)源(yuan)。經過(guo)聚焦整形(xing)後的光(guang)束(shu),垂直(zhi)照射在樣品(pin)流上,被(bei)熒(ying)光(guang)染(ran)色(se)的細胞在(zai)激(ji)光(guang)束(shu)的照射下(xia),產(chan)生(sheng)散(san)射(she)光(guang)和激(ji)發熒(ying)光(guang)。這兩(liang)種(zhong)信號(hao)同(tong)時(shi)被(bei)前(qian)向(xiang)光(guang)電二(er)極(ji)管(guan)和90°方向(xiang)的光(guang)電倍(bei)增管接收(shou)。光(guang)散(san)射(she)信號在前(qian)向(xiang)小(xiao)角(jiao)度進行(xing)檢(jian)測,這種(zhong)信(xin)號基本上反(fan)映(ying)了(le)細胞體(ti)積的大小(xiao);熒(ying)光(guang)信(xin)號的接(jie)受方向(xiang)與激(ji)光(guang)束(shu)垂直(zhi),經過(guo)壹系(xi)列雙(shuang)色(se)性(xing)反(fan)射(she)鏡(jing)和帶通(tong)濾光(guang)片(pian)的分(fen)離,形成(cheng)多(duo)個(ge)不同(tong)波(bo)長的熒(ying)光(guang)信(xin)號。
BD_FACSCanto流(liu)式細胞儀(yi)這些(xie)熒(ying)光(guang)信(xin)號的強度代(dai)表了(le)所(suo)測細胞膜(mo)表面抗(kang)原(yuan)的強度或其(qi)核(he)內(nei)物質(zhi)的濃(nong)度,經光(guang)電倍(bei)增管接收(shou)後(hou)可轉(zhuan)換(huan)為電信(xin)號,再(zai)通(tong)過(guo)A/D轉換(huan)器,將(jiang)連續(xu)的電信(xin)號轉換(huan)為可被(bei)計算(suan)機識別(bie)的數(shu)字信號。計算(suan)機把所(suo)測(ce)量到(dao)的各(ge)種信(xin)號進(jin)行計算(suan)機處(chu)理(li),將分(fen)析結果顯示(shi)在(zai)計算(suan)機屏(ping)幕上,液可以打印出來,還(hai)可以數據(ju)文件(jian)的形(xing)式(shi)存(cun)儲在(zai)硬(ying)盤上以備日後(hou)的查詢(xun)或(huo)進(jin)壹步分(fen)析。
檢(jian)測數(shu)據的顯示(shi)視(shi)測量參(can)數(shu)的不同(tong)由(you)多(duo)種形式(shi)可供(gong)選(xuan)擇(ze)。單(dan)參(can)數(shu)數(shu)據(ju)以直(zhi)方圖(tu)的形(xing)式(shi)表達(da),其X軸為(wei)測量強度,Y軸為(wei)細胞數(shu)目(mu)。壹(yi)般來(lai)說(shuo),流(liu)式(shi)細胞儀(yi)坐標軸的分(fen)辨率有512或(huo)1024通(tong)道(dao)數,這視(shi)其(qi)模(mo)數轉(zhuan)換(huan)器的分(fen)辨率而(er)定。對於雙參數或(huo)多(duo)參數數(shu)據(ju),既(ji)可以單(dan)獨(du)顯示(shi)每(mei)個(ge)參數的直(zhi)方圖(tu),也(ye)可以選(xuan)擇(ze)二維(wei)的三(san)點圖(tu)、等(deng)高線圖(tu)、灰(hui)度圖或(huo)三(san)維(wei)立體(ti)視圖(tu)。
細胞的分(fen)選(xuan)是(shi)通(tong)過(guo)分(fen)離含有單(dan)細胞的液滴(di)而(er)實現(xian)的。在(zai)流(liu)動(dong)室(shi)的噴口上配有壹(yi)個(ge)超(chao)高(gao)頻電晶(jing)體(ti),充(chong)電後(hou)振動,使(shi)噴出的液流斷裂(lie)為(wei)均(jun)勻的液滴(di),待(dai)測定細胞就分(fen)散(san)在(zai)這些(xie)液滴(di)之中。BD_FACSCanto流(liu)式細胞儀(yi)將這些(xie)液滴(di)充(chong)以正負(fu)不同(tong)的電荷(he),當液滴(di)流(liu)經帶有幾(ji)千(qian)伏(fu)特(te)的偏(pian)轉(zhuan)板時(shi),在(zai)高壓(ya)電場(chang)的作(zuo)用(yong)下(xia)偏(pian)轉(zhuan),落(luo)入各(ge)自的收(shou)集(ji)容器中,不予(yu)充(chong)電的液滴(di)落(luo)入中間的廢液容器,從(cong)而(er)實現(xian)細胞的分(fen)離。