流式(shi)細胞術是(shi)壹(yi)種定量分(fen)析(xi)技(ji)術，是(shi)指(zhi)利(li)用BD_FACSCalibur流式(shi)細胞儀檢(jian)測細胞特異性(xing)標(biao)記熒光信(xin)號而測定細胞的(de)多種生物(wu)物(wu)理(li)性質的(de)方法(fa)，同時也(ye)是(shi)壹項(xiang)可(ke)以(yi)把(ba)具有(you)某相(xiang)同熒光信(xin)號特性的(de)某些細胞亞(ya)群從(cong)多細(xi)胞群體(ti)中(zhong)分離和(he)富(fu)集(ji)出(chu)來(lai)的(de)細胞分析(xi)技(ji)術。

　　流式(shi)細胞儀的(de)應用

　　1、DNA倍(bei)體分析

　　DNA分析是流式(shi)細胞儀初(chu)且(qie)是現(xian)在應用zui廣(guang)檢(jian)測項目(mu)。由於(yu)惡(e)性(xing)細胞DNA含量通(tong)常(chang)與(yu)正(zheng)常細(xi)胞不同，存在異(yi)倍(bei)體細胞，所以現(xian)有(you)很研(yan)究評(ping)價(jia)異(yi)倍(bei)體細胞與(yu)腫瘤(liu)惡(e)性(xing)度及(ji)其預後(hou)的(de)關系(xi)。DNA含(han)量檢(jian)測還可(ke)提(ti)供(gong)細(xi)胞周期(qi)方面的(de)信(xin)息，這在細(xi)胞生物(wu)學(xue)中(zhong)運(yun)用(yong)很廣(guang)泛。特別(bie)地，它可(ke)表(biao)示(shi)出(chu)細胞毒性(xing)藥物(wu)對細(xi)胞作(zuo)用過程。這些DNA檢(jian)測還可(ke)與(yu)細(xi)胞表面標(biao)誌物(wu)標(biao)記同時進行(xing)，這樣在細(xi)胞混(hun)合(he)培(pei)養(yang)中(zhong)，可(ke)通(tong)常(chang)追(zhui)蹤表達(da)特異標(biao)誌物(wu)的(de)細胞顯示(shi)其生長(chang)周(zhou)期(qi)情(qing)況(kuang)。所有方(fang)法(fa)都是(shi)基於(yu)染(ran)料(liao)能與(yu)核酸起特異的(de)化學(xue)反(fan)應並(bing)發(fa)射出(chu)熒光，常(chang)用的(de)染料(liao)為(wei)PI，DAPI。

　　2、細(xi)胞生存能力(li)實驗

　　使(shi)用(yong)Heochest 33342染料(liao)與(yu)DNA特異性(xing)結合(he)，後(hou)因細胞活(huo)力(li)不同染料(liao)的(de)結合(he)程(cheng)度也(ye)各(ge)異，故可(ke)評(ping)估(gu)細(xi)胞的(de)活(huo)性(xing)度(du)。

　　3、計數(shu)外周(zhou)血中(zhong)檢(jian)測網織紅(hong)細(xi)胞

　　使(shi)用(yong)TO染料(liao)能夠特異性(xing)地與(yu)RNA結合(he)，結合(he)系(xi)數(shu)高達(da)3000，故具有(you)很好(hao)的(de)性價(jia)比(bi)。

　　4、外(wai)周(zhou)血、骨(gu)髓(sui)采集(ji)物(wu)中(zhong)CD34陽性幹(gan)細(xi)胞計數(shu)，臨床上用於骨(gu)髓(sui)移植前(qian)幹(gan)細(xi)胞數(shu)理(li)的(de)測定。使(shi)用(yong)標(biao)準ISHAG方(fang)案，需要(yao)DNA或其他核染料(liao)占(zhan)用(yong)FITC通(tong)道，PE標(biao)記CD34抗(kang)體(ti)，PE-CY5標(biao)記CD45抗(kang)體(ti)。

　　5、交叉淋巴細胞、粒(li)細(xi)胞毒實驗

　　檢(jian)測識別(bie)供(gong)體血清中(zhong)免疫球(qiu)蛋(dan)白與(yu)受(shou)體(ti)粒(li)細(xi)胞之(zhi)間(jian)是(shi)否存在反(fan)應有著(zhe)重(zhong)要(yao)臨床意義，因為(wei)這種反應會(hui)導(dao)致移植後(hou)發(fa)熱(re)、移植後(hou)肺損(sun)傷(shang)及(ji)免疫(yi)性粒(li)細(xi)胞缺乏(fa)癥(zheng)。流式(shi)細胞儀可(ke)檢(jian)測全(quan)血樣本與(yu)血清孵(fu)育後(hou)粒(li)細(xi)胞上結合(he)的(de)人免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋(dan)白。FITC標(biao)記人免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋(dan)白抗(kang)體(ti)、PE標(biao)記粒(li)細(xi)胞表面標(biao)誌物(wu)、PE-CY5標(biao)記HLA抗(kang)體(ti)。

　　6、血小板自身抗(kang)體(ti)檢(jian)測

　　BD_FACSCalibur流式(shi)細胞儀血小板自身抗(kang)體(ti)識(shi)別(bie)人(ren)血小板抗(kang)原(yuan)，會(hui)引(yin)起(qi)各(ge)種臨床相關癥(zheng)狀(zhuang)，如(ru)新(xin)生兒自免性血小板減少(shao)癥(zheng)、輸血後(hou)紫癜、難治(zhi)性(xing)血小板減少(shao)。流式(shi)細胞可(ke)快速(su)準確(que)地檢(jian)測血小板自身抗(kang)體(ti)。FITC標(biao)記抗(kang)人(ren)免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋(dan)白抗(kang)體(ti)、PE標(biao)記識別(bie)血小板抗(kang)體(ti)。

　　7、移植交叉配(pei)型(xing)

　　原(yuan)細胞毒實驗，主(zhu)要(yao)用於(yu)避免(mian)移植物(wu)超(chao)急性(xing)排(pai)拆反應。流式(shi)細胞儀用(yong)於(yu)監測T或B細胞是否受(shou)到受(shou)體(ti)血清中(zhong)免疫球(qiu)蛋(dan)白攻擊(ji)，作(zuo)為(wei)HLA配(pei)型(xing)前(qian)的(de)預實驗。流式(shi)細胞儀因其高精(jing)確(que)性(xing)已(yi)成為(wei)該領域(yu)內的(de)金(jin)標(biao)準。FITC標(biao)記抗(kang)人(ren)免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋(dan)白抗(kang)體(ti)、PE標(biao)記識別(bie)T細(xi)胞CD3或B細胞CD29抗(kang)體(ti)。

　　8、檢(jian)測細胞經抗(kang)原(yuan)或細胞有絲(si)分(fen)裂刺(ci)激後(hou)活(huo)化(hua)效(xiao)應淋巴細胞早期(qi)活(huo)化(hua)指(zhi)標(biao)CD69可(ke)用(yong)來(lai)檢(jian)測免疫(yi)治療(liao)效(xiao)果。流式(shi)細胞使(shi)用(yong)三色(se)分析(xi)可(ke)監(jian)測淋巴細胞各亞(ya)群活(huo)化(hua)情(qing)況(kuang)：FITC標(biao)記的(de)CD3抗(kang)體(ti)、PE標(biao)記的(de)CD8抗(kang)體(ti)、PE-CY5標(biao)記的(de)CD69抗(kang)體(ti)。

　　9、細(xi)胞增殖(zhi)狀(zhuang)態(tai)檢(jian)測

　　核增殖(zhi)抗(kang)PCNA、Ki67、BrdUrd用(yong)於(yu)衡(heng)量細(xi)胞增殖(zhi)分(fen)裂狀(zhuang)況(kuang)，在評(ping)估腫瘤(liu)預後(hou)有重(zhong)要(yao)意義。為(wei)些標(biao)誌物(wu)的(de)檢(jian)測壹般(ban)同細胞表面標(biao)誌物(wu)同時檢(jian)測。FITC標(biao)記PCNA或Ki67或BrdUrd，PE或(並(bing))PE-CY5標(biao)記細胞表面標(biao)誌物(wu)。

　　10、染色(se)體分(fen)析

　　BD_FACSCalibur流式(shi)細胞儀染(ran)色(se)分析(xi)運(yun)用(yong)兩(liang)種特異性(xing)染料(liao)：Hoechest33258與(yu)核苷(gan)酸AT結合(he);Chromomycin A3與(yu)GC相(xiang)結合(he)。從(cong)而在雙參數(shu)坐標(biao)上根據(ju)染色(se)體ATCG含(han)量的(de)不同識別(bie)各(ge)種染色(se)體。平時進行(xing)的(de)染色(se)體分(fen)析耗(hao)時且需(xu)要(yao)操作(zuo)者ji具經驗，而用(yong)流式(shi)細胞儀時可(ke)快速(su)地識別(bie)出(chu)異常(chang)染色(se)體，如(ru)加(jia)配分選(xuan)系(xi)統(tong)可(ke)將(jiang)這些異常(chang)染色(se)體分(fen)選(xuan)出(chu)來(lai)作(zuo)進壹(yi)步分(fen)析(xi)。