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          BD_FACSCalibur流(liu)式細(xi)胞儀的(de)基(ji)本(ben)結構
          更(geng)新時間(jian):2021-06-24   點擊次(ci)數:2277次(ci)
            BD_FACSCalibur流(liu)式細(xi)胞儀的(de)結(jie)構(gou)壹(yi)般可(ke)分五部分,即(ji)數(shu)據(ju)貯存(cun)和(he)計(ji)算(suan)機(ji)控制(zhi)系統、流(liu)動(dong)系統、激(ji)光(guang)系統、光(guang)學(xue)和(he)電子系統。
            (1)數(shu)據(ju)貯存(cun)和(he)計(ji)算(suan)機(ji)控制(zhi)系統
            數(shu)據(ju)貯存(cun)采(cai)用(yong)列表(biao)排(pai)隊(dui)方(fang)式。利(li)用(yong)計算機用(yong)多種(zhong)圖形來(lai)表(biao)明各參(can)數(shu)間(jian)的(de)相互(hu)關(guan)系,以單(dan)參(can)數(shu)直方(fang)圖,雙(shuang)參數二維點圖,等(deng)高圖等(deng)方(fang)式顯(xian)示。數(shu)據(ju)分析壹(yi)般設定正確(que)的分析範(fan)圍,劃(hua)分計算(suan)區(qu)域(yu)和(he)計(ji)算(suan)結(jie)果(guo)。
            (2)流(liu)動(dong)系統
            流(liu)動(dong)系統是(shi)流(liu)式細(xi)胞儀的(de)心臟(zang),因(yin)為(wei)細(xi)胞懸液在(zai)被(bei)檢測(ce)之(zhi)前必須(xu)首先(xian)形成(cheng)壹個(ge)很(hen)細(xi)的(de)穩流(liu),細(xi)胞在(zai)其(qi)內部排(pai)成(cheng)單列(lie)通過測(ce)量區(qu)。細(xi)胞懸液和(he)鞘(qiao)液分別(是(shi)分別還(hai)是(shi)同時)進(jin)入(ru)流(liu)動(dong)室,鞘液的作(zuo)用是使(shi)樣(yang)品(pin)懸液中的粒(li)子組(zu)成(cheng)單壹(yi)縱(zong)列(lie)方(fang)式通過測(ce)量區(qu),保證(zheng)每(mei)個(ge)細(xi)胞通過激(ji)光(guang)照(zhao)射區的(de)時間(jian)相(xiang)等(deng),從(cong)而(er)得(de)到準(zhun)確(que)的細(xi)胞熒光信(xin)息。
            (3)激光系統
            多采用(yong)氬(ya)離子激光(guang)器。使(shi)發射光在(zai)可(ke)見(jian)光譜範(fan)圍內488nm激(ji)發。目前市(shi)場(chang)上大多數熒光色素(su)適用(yong)於(yu)此波(bo)長(chang)。激(ji)光(guang)的單色性好,功(gong)率(lv)高,穩定。
            (4)光學(xue)和(he)電子系統
            激(ji)光(guang)束(shu)射至(zhi)經(jing)流(liu)體(ti)力學聚(ju)焦(jiao)的個(ge)別(bie)細(xi)胞和(he)粒(li)子後,光散射(she)在(zai)各個(ge)方(fang)向(xiang)(360°)發射。有兩(liang)個(ge)光(guang)散射(she)參數(shu)需收集,前向(xiang)角(jiao)散射(she)(FSC)主要(yao)用(yong)於(yu)檢測(ce)細(xi)胞體(ti)積(ji)的(de)大小。另壹(yi)為(wei)側向(xiang)散射(she)(SSC)用於(yu)檢測(ce)細(xi)胞膜,胞質,核(he)膜等(deng)細(xi)胞內部結(jie)構(gou)及胞質內顆(ke)粒(li)。
            熒光信(xin)號(hao)是(shi)由(you)對(dui)細(xi)胞進(jin)行染色(se)的(de)特(te)異性(xing)熒光染料(liao)受(shou)到激(ji)光(guang)激發後發射的。熒光波(bo)長(chang)與(yu)激(ji)光波(bo)長(chang)不(bu)同,而(er)且強度較(jiao)弱(ruo),因(yin)此要(yao)使(shi)用(yong)光(guang)學(xue)濾(lv)片(pian)濾(lv)除(chu)非(fei)熒光信(xin)號(hao)並(bing)使(shi)用(yong)靈(ling)敏的檢測(ce)器。熒光測(ce)量時通常(chang)使(shi)用(yong)線性放大器(即(ji)放(fang)大(da)器的(de)輸(shu)出(chu)與輸(shu)入(ru)是(shi)線性關(guan)系),適用(yong)於(yu)較(jiao)小(xiao)範(fan)圍內變(bian)化(hua)的(de)信(xin)號(hao),如(ru)前向(xiang)角(jiao)散射(she)和(he)DNA測(ce)量。但(dan)有時需要(yao)對(dui)數(shu)放(fang)大(da)器(即(ji)輸(shu)出(chu)與輸(shu)入(ru)是(shi)對數(shu)關(guan)系)。如(ru)果(guo)原來輸(shu)出(chu)為(wei)1,當(dang)輸入增(zeng)加(jia)到原來的(de)10倍(bei)時,輸出(chu)是2。BD_FACSCalibur流(liu)式細(xi)胞儀在(zai)免疫學檢測(ce)中(zhong)常(chang)使(shi)用(yong)對(dui)數(shu)放(fang)大器,因(yin)為(wei)在(zai)免疫學的(de)樣(yang)品(pin)中,可(ke)能有的細(xi)胞未被(bei)染色(se)而(er)僅(jin)有自發熒光,為(wei)陰性(xing)群(qun)體(ti);被(bei)染上色的細(xi)胞特(te)異性(xing)熒光可(ke)能比(bi)自發熒光強數倍(bei)到數(shu)十(shi)倍(bei),為(wei)陽性(xing)群(qun)體(ti)。使(shi)用(yong)對(dui)數(shu)放(fang)大器可(ke)以同時分辨出(chu)亮度(du)差(cha)異大的(de)多個(ge)細(xi)胞亞群(qun),容易選(xuan)定不同亞(ya)群(qun)間(jian)的(de)分界(jie)點,有利(li)於(yu)流(liu)式細(xi)胞儀的(de)分析和(he)分選(xuan)。
            熒光信(xin)號(hao)的(de)補(bu)償:當(dang)用壹種(zhong)激光(guang)束(shu)同時激發兩(liang)種(zhong)染料(liao)發射出(chu)兩(liang)種(zhong)不同波(bo)長(chang)的(de)熒光時,兩(liang)種(zhong)熒光發射光譜有壹定的重(zhong)叠,可(ke)用電補償減(jian)去不(bu)適合(he)熒光通道測(ce)定的重(zhong)叠信(xin)號(hao)。
            (5)細(xi)胞分選(xuan)系統
            細(xi)胞分選(xuan)可(ke)使(shi)被(bei)特(te)定的細(xi)胞從細(xi)胞群(qun)體(ti)中分離出(chu)來。流(liu)式細(xi)胞儀所測(ce)定的任何參(can)數(shu)都可(ke)以作(zuo)為(wei)細(xi)胞分選(xuan)依(yi)據(ju),被(bei)選(xuan)出(chu)來的(de)細(xi)胞的均(jun)壹(yi)性(xing)與(yu)所測(ce)參(can)數有關(guan)。其(qi)工(gong)作(zuo)原理是把(ba)液滴形成(cheng)信(xin)號(hao)在(zai)壓(ya)電晶體(ti)上使(shi)之(zhi)產(chan)生機(ji)械振(zhen)動(dong)(不(bu)太(tai)通順),液柱斷裂成(cheng)壹連(lian)串(chuan)均(jun)勻的液滴,壹部分液滴中包(bao)有細(xi)胞,如(ru)果(guo)其(qi)特(te)性與(yu)被(bei)選(xuan)定要(yao)進(jin)行分選(xuan)的細(xi)胞特(te)性相(xiang)符(fu),則(ze)帶有特(te)定的電荷。BD_FACSCalibur流(liu)式細(xi)胞儀帶(dai)有電荷的(de)液滴向(xiang)下落(luo)入偏轉板的高壓(ya)靜電場時,偏轉落(luo)入特(te)定的收集器內,完成(cheng)細(xi)胞分類(lei)收集的(de)目(mu)的。
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