ABI_Stepone 熒(ying)光定量(liang)PCR儀(yi)因(yin)操作(zuo)方便、運行速度(du)快、實(shi)驗結(jie)果(guo)準確，受到越來(lai)越多(duo)的分子生(sheng)物學研(yan)究者(zhe)青睞(lai)。在(zai)實驗技術成(cheng)熟(shu)的今天(tian)，也(ye)許對妳來(lai)說，最(zui)難(nan)得(de)不是(shi)實驗技術上(shang)的問題(ti)——而(er)是(shi)選擇(ze)哪壹種(zhong)熒(ying)光定量(liang)PCR儀(yi)——妳要征詢實驗室(shi)成(cheng)員(yuan)的意(yi)見、分析(xi)實驗室(shi)目(mu)前(qian)乃至將(jiang)來(lai)的需求(qiu)、平(ping)衡實驗室(shi)的預(yu)算(suan)，更(geng)要詳細研(yan)究各(ge)種極富(fu)吸引力(li)的宣傳資料。面對各種不同(tong)性(xing)能的產(chan)品(pin)，您又(you)該如何(he)選擇(ze)呢(ne)？
建(jian)議大家走出認(ren)識(shi)熒(ying)光定量(liang)PCR的兩個誤區：
誤區壹：儀(yi)器(qi)通(tong)道越多(duo)越好
隨著(zhe)PCR技術的成(cheng)熟(shu)運用，多(duo)重擴(kuo)增越來(lai)越熱(re)鬧，熒光定量(liang)PCR儀(yi)也(ye)不能(neng)幸(xing)免(mian)。從最初推(tui)出的單(dan)通(tong)道熒光定量(liang)PCR儀(yi)發展到如今各(ge)個廠(chang)家都推(tui)出4通(tong)道、5通(tong)道甚至6通(tong)道熒光定量(liang)PCR儀(yi)，眼(yan)花(hua)繚(liao)亂的選(xuan)擇(ze)讓(rang)人無(wu)所適(shi)從，就有(you)人(ren)壹不小(xiao)心(xin)走進(jin)了(le)“通(tong)道越多(duo)越好”的誤區。
在(zai)使(shi)用有(you)些(xie)廠家5通(tong)道的熒(ying)光定量(liang)儀(yi)時(shi)，為(wei)了(le)確(que)保(bao)實(shi)驗結(jie)果(guo)的精(jing)確性(xing)和(he)準確性都要(yao)在實(shi)驗中(zhong)使(shi)用ROX（壹種(zhong)熒(ying)光染(ran)料）或(huo)專(zhuan)用(yong)的Reference dye ，這(zhe)些熒(ying)光染(ran)料都(dou)必(bi)須單(dan)獨使(shi)用壹個(ge)檢(jian)測通(tong)道。這樣(yang)以來(lai)，真(zhen)正(zheng)能檢(jian)測多(duo)重PCR熒(ying)光信(xin)號(hao)的有(you)效通(tong)道只(zhi)有(you)4個(ge)，而(er)且(qie)使(shi)用校正(zheng)染(ran)料可(ke)能(neng)會增加後期的使(shi)用成(cheng)本。有(you)的熒(ying)光定量(liang)PCR的檢(jian)測通(tong)道是(shi)只(zhi)為(wei)自(zi)已廠家的專(zhuan)用(yong)的熒(ying)光染(ran)料或(huo)試劑開(kai)放的，有(you)效檢(jian)測通(tong)道也(ye)絕非(fei)像宣傳資料中(zhong)宣稱(cheng)的那(na)麽(me)多(duo)。在購(gou)買(mai)前(qian)確認(ren)ABI_Stepone 熒(ying)光定量(liang)PCR儀(yi)的有(you)效檢(jian)測通(tong)道尤為重要，不能(neng)單(dan)單(dan)只(zhi)聽(ting)宣傳。
考(kao)慮(lv)多(duo)重熒(ying)光定量(liang)PCR的通(tong)道數的時(shi)候也(ye)應(ying)該從實驗室(shi)實(shi)際情況出發，多(duo)重PCR並(bing)非(fei)人人(ren)適(shi)用、人(ren)人(ren)可(ke)用(yong)，因為它使(shi)實驗復(fu)雜(za)化(hua)了(le)。
誤區二(er)：real-time PCR儀(yi)無(wu)需梯(ti)度(du)功能(neng)
對於(yu)使(shi)用染(ran)料法(fa)的定量(liang)PCR反(fan)應(ying)，雖然(ran)有(you)各(ge)種各樣(yang)的PCR引(yin)物設(she)計(ji)軟(ruan)件或(huo)者(zhe)經(jing)驗公式計(ji)算(suan)熔解溫度(du)（Tm值(zhi)），但(dan)運用的公式不同(tong)、引(yin)物序列(lie)不同(tong)，Tm值(zhi)的差(cha)異(yi)會很(hen)大(da)。引(yin)物的熔解溫度(du)決(jue)定了(le)退(tui)火(huo)溫度(du)。而(er)且(qie)模(mo)版中(zhong)堿基的組(zu)合(he)千變(bian)萬(wan)化(hua)，對於(yu)特(te)殊(shu)片(pian)斷，經驗公式得(de)到的數據(ju)不壹定能(neng)得(de)出準確的結(jie)果，退(tui)火(huo)溫度(du)細微的差(cha)異(yi)對結果都可(ke)能(neng)產(chan)生(sheng)決(jue)定性(xing)的影(ying)響，因(yin)而(er)“摸(mo)條(tiao)件”壹度(du)是(shi)讓(rang)人很(hen)頭(tou)疼(teng)的問題(ti)。梯(ti)度(du)PCR的出現部(bu)分解決(jue)了(le)壹些(xie)問題(ti)——在(zai)反(fan)應(ying)過(guo)程中(zhong)每個孔(kong)的溫度(du)控制(zhi)條(tiao)件可(ke)以在特(te)定範(fan)圍內(nei)按(an)照梯(ti)度(du)變(bian)化(hua)，根(gen)據(ju)結果，壹步就可(ke)以摸索(suo)出適(shi)合(he)的反(fan)應(ying)條(tiao)件。
不單(dan)退(tui)火(huo)溫度(du)，連變(bian)性溫度(du)和延(yan)伸(shen)溫度(du)都可(ke)以優化(hua)——對於(yu)多(duo)種聚(ju)合(he)酶(mei)混(hun)合(he)酶(mei)擴增(zeng)如Invitrogen、Clontech、Promega的多(duo)數高(gao)保(bao)真(zhen)Taq酶(mei)來(lai)說這(zhe)個(ge)非常(chang)重(zhong)要(yao)，因(yin)為(wei)Taq和校(xiao)正(zheng)酶(mei)的最(zui)佳反(fan)應(ying)溫度(du)可(ke)能(neng)有(you)顯(xian)著(zhu)差異(yi)，優化(hua)延(yan)伸(shen)溫度(du)就顯得(de)很重(zhong)要(yao)。
使(shi)用有(you)梯(ti)度(du)功能(neng)的ABI_Stepone 熒(ying)光定量(liang)PCR儀(yi)可(ke)以壹次(ci)完(wan)成(cheng)以往多(duo)次實(shi)驗才能(neng)完(wan)成(cheng)的優(you)化(hua)過(guo)程，簡(jian)化(hua)了(le)摸(mo)索(suo) PCR反(fan)應(ying)條(tiao)件的繁(fan)瑣(suo)實(shi)驗，既(ji)節省實(shi)驗時(shi)間(jian)提高(gao)效率(lv)，又(you)節省實(shi)驗成(cheng)本。
