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          Beckman_L-100XP超速(su)離心(xin)機(ji)的(de)離心(xin)方(fang)法(fa)
          更(geng)新時間:2020-04-26   點擊次數(shu):2325次
            Beckman_L-100XP超速(su)離心(xin)機(ji)用離心(xin)方(fang)法(fa)分離生(sheng)物(wu)大(da)分子(zi)和(he)亞細胞物(wu)質(zhi)的(de)基(ji)本原(yuan)理(li)是(shi)根(gen)據它(ta)們(men)在(zai)液體(ti)介(jie)質(zhi)中(zhong)或(huo)者(zhe)沈降(jiang)速(su)度不(bu)同而形成(cheng)不(bu)同的區(qu)帶(dai),或(huo)者(zhe)它(ta)們(men)的(de)密(mi)度不(bu)同而停留(liu)在液體(ti)介(jie)質(zhi)中(zhong)不(bu)同的位(wei)置(zhi)而把它(ta)們(men)壹(yi)壹分開(kai)。前(qian)者(zhe)是沈(chen)降(jiang)速(su)度法(fa),應(ying)用該法(fa)時液體(ti)介(jie)質(zhi)的zui大(da)密(mi)度要(yao)小(xiao)於樣(yang)品中(zhong)zui小顆(ke)粒的密(mi)度,離心(xin)時選(xuan)用高(gao)轉(zhuan)速(su)和短(duan)時間;後者(zhe)是沈(chen)降(jiang)平(ping)衡(heng)法(fa),應(ying)用該法(fa)時液體(ti)介(jie)質(zhi)的zui大(da)密(mi)度要(yao)大(da)於樣(yang)品中(zhong)zui小顆(ke)粒的密(mi)度,離心(xin)時選(xuan)用較低(di)轉(zhuan)速(su)和較長(chang)時間。實(shi)際操(cao)作有幾(ji)種(zhong)形式:
            差速(su)離心(xin)
            這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)是選(xuan)擇(ze)不(bu)同轉速(su)的離心(xin),分別(bie)分離各(ge)個(ge)不(bu)同組分。例如先(xian)用低(di)速(su)沈降大(da)顆(ke)粒和上清液,在高(gao)速(su)離心(xin)上(shang)清沈(chen)降(jiang)中(zhong)等顆(ke)粒,zui後超速(su)離心(xin)上(shang)清沈(chen)降(jiang)小顆(ke)粒。采用逐(zhu)級(ji)提高離心(xin)力(li)分離上(shang)情液的方(fang)法(fa),把不(bu)同大(da)小(xiao)的(de)顆(ke)粒分開(kai)。
            這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)比(bi)較簡(jian)單(dan),方(fang)便。分離的(de)組份(fen)沈到管底(di),因(yin)此(ci)可以迅(xun)速(su)濃(nong)縮所(suo)要(yao)的(de)組份(fen),減少體(ti)積。但(dan)回收率(lv)和純度是有矛盾的(de),要(yao)提高回收率(lv),勢(shi)必提高轉(zhuan)速(su)或(huo)延(yan)長離心(xin)時間,這(zhe)樣(yang)大(da)小(xiao)相(xiang)近(jin)的顆(ke)粒也會沈(chen)到管底(di)。因(yin)此(ci)該法(fa)多用於粗(cu)提純或(huo)初步濃(nong)縮樣(yang)品。
            速(su)度區(qu)帶(dai)(或(huo)速(su)度梯度)離心(xin)
            本法(fa)是將(jiang)樣品放在壹(yi)個(ge)連(lian)續(xu)的密(mi)度梯度液體(ti)上(shang),通過(guo)離心(xin),大(da)顆(ke)粒沈降快,小(xiao)顆(ke)粒沈降慢。經(jing)過(guo)壹(yi)段時間,相(xiang)同的顆(ke)粒就在同壹深度
            形成(cheng)壹(yi)條(tiao)帶子(zi),因(yin)此(ci)把(ba)各(ge)種(zhong)組份(fen)分開(kai)來(lai)。它(ta)適用於分離密(mi)度相同、而大(da)小(xiao)不(bu)同的物(wu)質(zhi),如(ru)不(bu)同的蛋白質(zhi)組份(fen)密(mi)度都差(cha)不(bu)多,但(dan)分子(zi)量(liang)不(bu)壹樣(yang),用本法(fa)很容(rong)易將(jiang)其分開(kai)。但(dan)對(dui)密(mi)度不(bu)同、大(da)小(xiao)類(lei)似(si)的物(wu)質(zhi)則(ze)不(bu)易分離。
            Beckman_L-100XP超速(su)離心(xin)機(ji)蔗(zhe)糖(tang)梯度是(shi)壹種(zhong)常(chang)用的(de)介(jie)質(zhi)。用不(bu)同濃(nong)度的(de)蔗(zhe)糖(tang)溶液(5%-60%)配成(cheng)梯度,用於梯度離心(xin)。再(zai)分別(bie)進(jin)行(xing)收集(ji)處於不(bu)同區(qu)帶(dai)裏的(de)各(ge)個(ge)組份(fen)。
            沈降(jiang)平(ping)衡(heng)離心(xin)
            這(zhe)是(shi)靜(jing)力學的(de)方(fang)法(fa)。在離心(xin)管(guan)中(zhong)形成(cheng)壹(yi)個(ge)液體(ti)梯度,在(zai)離心(xin)時各(ge)組份(fen)以不(bu)同的速(su)度下沈,但(dan)zui終(zhong)停留(liu)在與自(zi)己相同的密(mi)度中(zhong),形成(cheng)壹(yi)條(tiao)狹窄的(de)平(ping)衡(heng)帶,並(bing)保(bao)持相(xiang)對的穩定(ding)。為了(le)使樣(yang)品所(suo)有組份(fen)都能(neng)達到它(ta)們(men)的(de)平(ping)衡(heng)位(wei)置(zhi),需要(yao)長(chang)時間離心(xin)。這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)適用於分離大(da)小(xiao)相(xiang)似(si)但(dan)密(mi)度不(bu)同的物(wu)質(zhi),如(ru)核(he)酸的分離。氯(lv)化(hua)銫(se)梯度是(shi)常(chang)用於平(ping)衡(heng)離心(xin)的(de)介(jie)質(zhi),分辨率(lv)很高,可區(qu)別(bie)密(mi)度相差(cha)0.05的組分,但(dan)離心(xin)時間需(xu)十幾(ji)到幾十小(xiao)時,且價(jia)格很(hen)貴(gui)。已有(you)壹種(zhong)商(shang)品名叫(jiao)"Percoll"的聚(ju)蔗(zhe)糖(tang)溶液可以代(dai)替(ti)氯(lv)化(hua)銫(se)梯度。該介(jie)質(zhi)能(neng)迅速(su)形成(cheng)梯度,使(shi)離心(xin)時間大(da)大(da)縮(suo)短(duan)到1-2h而仍有很好的分離效(xiao)果(guo)。Beckman_L-100XP超速(su)離心(xin)機(ji)並(bing)且有(you)配(pei)套的(de)標(biao)記(ji)珠(zhu)(Density marker beads)可以測(ce)定(ding)樣(yang)品的(de)密(mi)度。
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